ELISA定量检测初乳中抗PEDV IgA抗体的研究及其在监测种猪群PEDV抗体保护力中的应用
摘要
2013年,猪流行性腹泻病毒(PEDV)通过引种传入北美,迫切需要建立可靠的PEDV诊断方法。基于PEDV S基因的S1部分,最近本小组研发了酶联免疫吸附法(ELISA)。采集239个场的血清样品,用S1-酶联免疫吸附法(s1-ELISA)进行诊断,敏感性为100%,诊断的特异性为94%。通过初乳获取被动免疫可保护4-14日龄的哺乳仔猪。研究发现,母乳中的IgA抗体滴度高,为哺乳仔猪对抗肠道冠状病毒提供了保护力,如猪传染性胃肠炎(TGEV)和猪流行性腹泻病毒(PEDV),而母乳中的IgG抗体通常不足以保护哺乳仔猪,血清中的中和抗体亦不足以保护初生仔猪。本研究选用已知PEDV情况场的初乳样品,监测PEDV保护力,改进现有的以IgG为基础的PEDV ELISA检测方法,检测初乳和奶水中的IgA。
材料和方法
本实验所用的133份母乳样品来自3个不同猪群。102份为PEDV阴性场的初乳样品,是2010年以来从爱荷华州的两个猪场收集的,这两个猪场的猪传染性胃肠炎(TGEV)和猪呼吸道冠状病毒(PRCV)感染情况是未知的。另外31份样品为PEDV阳性场的初乳样品,是2013年11月从爱荷华州的一个猪场收集的,该场于当年5月份感染了PEDV,已知该场的PRCV阳性和TGEV阴性。
随着ELISA的发展,将现有的用于检测IgG PEDV S1蛋白的ELISA法被稍加改进并用于初乳的检测。具体来说,所有样本都监测了抗-PEDV IgA和IgG,并对其结果进行了比较。
结果
在初乳样品中, PEDV阳性场的样品,抗-IgG PEDV抗体阳性率为90.3%(28/31),抗-IgA PEDV抗体阳性率为100%(31/31);而PEDV阴性场的样品,抗-IgG PEDV抗体阳性率为8.9%(9/102),抗-IgA PEDV抗体阳性率为0(0/102)。结果显示,以IgA为基础的测定方法特异性更高(如图1)。
图1阳性场和阴性场初乳样品PEDV IgA ELISA检测结果分布,分析截止=黑线
结论与讨论
血清中IgG抗体的存在,与其对抗主要在粘膜表面复制的病原体如PEDV、为小猪提供的保护力不是正相关的。在这种情况下,检测初乳或普通乳汁中的IgA可能是合适的。由于目前美国没有可用的PEDV疫苗,给妊娠母猪返饲PEDV阳性仔猪的肠道及其内容物,人为地刺激乳源免疫力,试图减少PEDV的持续时间和发病规模。然而,因为肠内容物的PEDV病毒滴度的非同源性,整个猪群的乳源免疫力感应是不一致的。因此,监测初乳和普通乳汁中的IgA浓度对保证仔猪获得足够的被动免疫很重要。本研究建立的检测IgA初乳抗体的S1-ELISA法为监测PEDV被动免疫提供了特异和敏感的方法。哺乳期间分泌到乳汁中的IgA抗体持久性还需进一步研究。
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