血清学解读：猪繁殖与猪呼吸综合征病毒！

• 2023-07-31 01:30:38 • 0次

猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)现在流行于美国、加拿大、欧洲和亚洲。但科学家怀疑该病毒在世界各地均有分布。世界其它地区的诊断学家不断发展该病的诊断技术，检测病毒将变得更为容易，也将印证我们的怀疑。养猪从业者可以从确诊PRRS的过程中了解该病。该病的临床症状复杂，可感染呼吸系统和生殖系统，并且易感

　　20世纪80年代中晚期，易感猪感染PRRS能够引发较为一致的临床症状。许多感染PRRS的猪群同时发生繁殖障碍和呼吸道疾病，且繁殖障碍更为严重。母猪表现以下典型症状：中度发热(104到106华氏度)，短时间的食欲减退，早产(108-110天)导致死胎数明显增加，随后出现妊娠早期母猪流产，木乃伊胎增多。出生的活仔中很多较弱，几小时内死亡；存活下来的仔猪生长缓慢，易发细菌病，最终死亡，通常很难控制。这些细菌病中包括链球菌病、鼻炎和格氏病(副猪嗜血杆菌)等等。通常，断奶前和断奶后猪出现严重的呼吸道疾病，表现为急促的腹式呼吸，多称为“呼吸困难”。PRRSV在肺内增殖引起间质性肺炎，但其他病毒也可引起类似病变，因此发现间质性肺炎提示可能存在PRRSV感染，但不等同于确诊为PRRS。

　　PRRS在猪群中渐渐“成熟”，其临床症状也随之发生改变。前面描述同时存在繁殖障碍和呼吸道症状的经典PRRS仍有发生。但更为常见的是只出现繁殖障碍或呼吸道症状。并且现在发生时呼吸道症状比繁殖障碍明显。

　　保育猪和生长育肥猪出现呼吸道问题，尤其是抗生素治疗效果不明显时，PRRS可疑。即使已知这种呼吸道疾病的病原为胸膜肺炎放线杆菌或猪霍乱沙门氏菌，但PRRS感染也可能在其中发挥启动或加重病情的作用。

　　血清学诊断

　　现有的检测PRRSV特异性抗体的方法包括间接荧光抗体检测(IFA)、血清病毒中和试验(SVN)、免疫过氧化物酶单层试验(IPMA)和酶联免疫吸附试验(ELISA)。其中，IFA，SVN和ELISA检测是现阶段北美兽医诊断实验室采用的检测方法。

　　IFA具有高度的特异性(99.5%)，但不同动物个体的敏感性不确定。与ELISA相比，IFA的优势在于能够确定抗体滴度。根据试验中血清的初始稀释度，滴度为16或20视为阳性。然而由于结果为主观判定，不同实验室或检测员进行检测时IFA滴度终点会有差异。这也限制了IFA在小规模样品检测上的应用。此外，由于PRRSV抗原的多样性，检测所用的PRRSV毒株不同，检测结果也会不同(阴性vs阳性，或滴度)。

　　最近出现了检测PRRSV特异性IgM抗体的IFA方法。这种方法可用于检测急性/最近发生的PRRSV感染，滴度16或20为阳性。很有意思的是，研究表明IgM阳性样品中81%的样品可分离到病毒。然而，值得关注的是该方法存在由非特异性IgM引起的假阳性结果，因此该方法在广泛用于常规诊断之前必须对其所有的实验性能包括特异性和敏感性进行评估。

　　ELISA的不同形式包括：采用样品与阳性比值的间接ELISA，直接采用OD值的间接ELISA和阻断ELISA。IDEXX ELISA试剂盒检测样品，S/P值等于或高于0.4时为阳性。据报道，该方法灵敏而特异，敏感性为100%，特异性为99.5%。

　　尽管S/P值与IFA滴度间可能存在关联，但生产商不推荐以这种方式来解读S/P值。许多兽医诊断学家和从业者认为S/P值为2.5或以上即表示最近发生或正在发生感染。自动化操作是该方法的一大优势，因为自动操作差异小，且易于实现高水平的质量控制。此外，ELISA还有其他优点：a）欧洲株和美洲株PRRSV抗体均可检测；b) 检测周期短；c) 通过USDA和AgCanada认证。

　　SVN检测也是一种特异性检测，但以前的试验显示SVN的敏感性低于IFA和ELISA方法。目前，滴度4视为阳性。最近的研究显示被测血清中加入新鲜猪血清可提高SVN检测的敏感性。即便如此，SVN方法也最好作为一种研究工具而非常规诊断手段来使用。

　　血清学结果

　　试验感染PRRSV的猪，IFA，ELISA，SVN首次检测到病毒特异性抗体IgG的时间分别为感染后7-11，9-13和9-28天，达到高峰的时间则为感染后30-50，30-50和60-90天。感染后5天内检测到PRRSV特异性IgM抗体，并可维持到感染后21-28天。实验和田间观察显示IFA， ELISA和SVN检测抗体滴度通常分别在4-5个月，4-10个月和12个月时降至不可检测水平。未接触过该病原的猪接种疫苗后抗体也呈现相同的时间模式。

　　基于Rollings Laboratory对30,000份血样的检测结果，我们得到以下关于PRRS的信息：

　　1）未免疫小母猪，后备公猪和成年种猪的S/P值<2.25（测定值与阳性对照测定值的比值），显示在采血时可能有病毒血症。血清S/P值在3.5到5.0之间或高于5.0时，很可能为最近感染的猪。未成年猪上也观察到相同情况。

　　2）对发生感染的免疫猪群进行评价时，可参照以下模式：

　　对保育猪为阴性的稳定种猪群来说，母猪和公猪的S/P值为阴性到较低的2，但不高于2.5。阴性架子猪试验接种疫苗后S/P值高于3.5。但曾发生感染的稳定猪群即分娩率和每头母猪每年的断奶仔猪数均比较理想，接种疫苗后，免疫的母猪和公猪没有观察到这种抗体反应。

　　免疫繁殖猪群的平均S/P值为1.00是比较理想的。免疫后30到60天以内20%免疫猪为阴性是比较典型的。典型的免疫较好的猪群S/P值在0.7到1.8之间，有些猪可达到2.0以上。如果种猪群每年两次接种疫苗，免疫后60天以内免疫种猪20%以上为阴性，则应对疫苗处理和接种操作进行检查。

　　对每年四次或更多次接种疫苗的猪群来说，超过20%的免疫猪为血清阴性并非不常见。但缺乏可检测体液抗体的依据尚不清楚。但这些血清阴性的免疫猪在被田间PRRSV毒株感染后，多数会转阳。田间毒株侵入并传播引起免疫猪群再次发生繁殖障碍或生产成绩不佳，抗体水平则会发生变化。反复感染的母猪抗体水平高于3.0也不是不常见，如上所述，通常此类猪群所有的母猪和公猪ELISA检测都为阳性。

　　3）免疫母猪所产仔猪的母源抗体逐渐下降，而种猪群中存在病毒循环，3-4周龄仔猪的S/P值在0.7到阴性之间。抗体水平高于1.8的猪可能为断奶后转入保育舍有病毒血症的猪。在没有病毒循环的保育舍，多数仔猪在6周龄时为阴性。如果保育舍有很多猪发生病毒血症，则7周龄时S/P值会升高，多数猪呈阳性，S/P值高于1。9到10周龄时，若保育舍病毒循环非常活跃，则所有猪均为阳性。多数7到10周龄的阳性保育猪很可能排出PRRSV。

　　4）转入育肥舍时30到80%的保育猪为阳性，随后在育肥舍继续发生感染，血清转阳。这期间平均S/P值可能不升高。我们观察到许多猪舍中阳性猪比例很高，但S/P值很少高于1.8。其原因可能与房舍的设计及猪的流动有关。

　　血清学检测结果的应用

　　解读PRRS血清学结果时应考虑到以下几个问题或局限。美国猪群中PRRS流行率(80%)很高，单个样品的血清学信息不足以诊断临床PRRS。例如，一头猪采一次样测定为血清阴性，这一结果有好几种可能性：

　　1）这头猪未被PRRSV感染；

　　2）这头猪最近感染PRRSV但尚未发生血清转阳；

　　3）这头猪感染了PRRSV但血清呈阴性；

　　4）由于检测方法的敏感性低或操作失误造成阴性。

　　因此，PRRS血清学方法应主要用于确定猪群是否曾发生PRRSV感染。

　　PRRSV特异性抗体不能维持终生。IFA和/或ELISA可测抗体的持续时间相对较短，推荐用于青年猪的检测，以建立猪群的PRRSV感染状况。在单点式从分娩到育肥猪场，生长育肥猪的PRRSV感染的血清学流行率往往最高。通常10份育肥猪的血清样本足以确定猪群是否曾感染PRRSV。对多点式生产系统来说，各生产阶段均为一个单独的群体，因此每个场区都应采样。

　　检测到成对样品血清转阳即可诊断繁殖障碍或呼吸疾病的原因为PRRSV感染。为了进一步确认正在发生PRRS，建议将血清学检测和病毒分离结果(如病毒血症)结合起来。

　　采用IgM IFA，IgG IFA和SVN方法，获得的血清学结果可将猪群中感染PRRSV的猪分为3类：未感染猪、急性感染猪和抗体水平下降的猪。未感染猪3种方法的检测结果均为阴性。急性感染猪则是IgM和/或IgG的IFA滴度为64的，但没有可检测的SVN抗体。

　　部分研究数据显示PRRS特异性SVN抗体在清除血中循环病毒方面发挥作用。然而，在存在循环抗体的条件下发生长期病毒血症和PRRSV持续感染，低浓度病毒特异性抗体存在时PRRSV感染的抗体依赖增强效应，这两种现象对抗体的保护作用提出质疑。因此，确定中和抗体与保护性免疫的关系非常重要。

　　PRRS病毒分离株的广泛抗原变异会影响猪群的血清学信息的解读，因为诊断实验室所用的毒株可能会导致假阳性结果。这一潜在问题可通过使用商品化ELISA试剂盒来避免，因为IDEXX试剂盒含有多种不同PRRS病毒的抗原。实际上，该试剂盒可用于检测北美株和欧洲株PRRS病毒分离株的抗体。

　　尽管现有的PRRS血清学检测方法存在许多限制和缺陷，但推荐将这些血清学方法对猪群进行：a) 临床疾病过程检测；b) 来源猪场和引入猪群的PRRS感染情况评价；c)疫苗效率评价。

附件

　　多数北美兽医诊断实验室都使用IFA检测，但欧洲实验室则使用PRRS病毒感染的猪肺泡巨噬细胞进行IPMA检测。各种检测方法的优缺点总结于表1。

　　表1 PRRS血清学检测的对比

　　方法优点缺点

方法

优点

缺点